Freqüentemente, microscópios sofisticados e bem equipados não produzem imagens excelentes devido ao uso incorreto da fonte de luz, o que geralmente leva a uma iluminação inadequada da amostra. Quando otimizado, a iluminação da amostra deve ser brilhante, sem brilho e dispersa uniformemente no campo de visão.
Existem inúmeras fontes de luz disponíveis para iluminar microscópios, tanto para observação de rotina quanto a fotomicrografia crítica. Uma fonte de luz mais comum, devido ao seu baixo custo e longa vida útil, é a lâmpada de halogênio de 50 ou 100 watts de tungstênio, como ilustrado na base do diagrama de microscópio na Figura 1, que também detalha as vias ópticas em um microscópio de luz transmitido moderno típico. Nesta figura, a lâmpada de tungsten-halogênio emite um espectro contínuo de luz centralizado em 3200 K (quando definido em uma tensão de lâmpada de +9 volts), que é passada por uma lente de colecionador e campo antes de ser refletida no condensador de subestágio e no espécime. Os raios de luz que formam a imagem são capturados pelo objetivo do microscópio e passados para as oculares ou direcionados por um Beamsplitter para uma das várias portas da câmera. Ao longo da via óptica do microscópio, a iluminação é direcionada e focada através de uma série de diafragmas e lentes enquanto viaja da fonte para iluminar a amostra e depois para as oculares ou acessórios da câmera. O alinhamento dos componentes ópticos de um microscópio para otimizar a iluminação nos microscópios modernos é realizado após as regras da iluminação de Köhler. Mais detalhes de como os microscópios de luz transmitidos e refletidos são alinhados para a iluminação de corretos de correção discutida em nossas seções sobre a configuração de um microscópio for transmitido por luz e luz refletida. As vias ópticas mostradas acima na Figura 1 são típicas para um microscópio de luz transmitido e envolvem várias lentes, diafragmas, espelhos e plitadores de feixes para direcionar a luz através do microscópio.
As lâmpadas de tungsten-halogênio são relativamente brilhantes com um espectro de cores centrado em 3200 K (quando definido em aproximadamente +9 volts), mas requer filtros de conversão de cores para aumentar sua temperatura de cor à equivalência da luz do dia. Outra fonte de luz popular é a lâmpada de xenônio de 75 a 150 watts devido ao seu brilho muito alto e vida longa, uma saída relativamente uniforme no espectro visual e uma temperatura de cor que se aproxima do que exigia por emulsões de filme da luz do dia. Onde é necessária uma intensidade de luz muito alta, as lâmpadas de halídeo de lata são frequentemente usadas. Influerecencemicroscopia, particularmente para fins de fotomicrografia crítica, queimadores de mercúrio de 100 ou 200 watts são frequentemente empregados. Nos anos anteriores, luzes de arco de carbono ou lâmpadas de zircônio podem ter sido usadas, mas essas fontes raramente são vistas hoje. Para obter mais informações e uma discussão detalhada sobre o amplo espectro de lâmpadas disponíveis para iluminação por microscópio, visite nossa seção Fontes Onlight para microscopia e fotomicrografia.
O alinhamento da iluminação da fonte através de vias ópticas na microscopia de luz refletida também é uma preocupação primária, particularmente em relação à metalografia, inspeção de wafer semicondutores e o novo progresso notável que está sendo feito na microscopia de fluorescência. Os microscópios de luz refletidos também são iluminados com uma variedade de fontes de luz (como discutido acima) e podem ser ajustados para o desempenho ideal usando a iluminação Köhler. Isso é discutido em mais detalhes em nossa seção sobre a configuração da iluminação de Köhler para microscopia de luz refletida. As vias de iluminação para microscopia de luz refletidas também são o tópico de vários tutoriais interativos de Java, incluindo o vinculado diretamente abaixo.
Em seu excelente livro "Fotografia através do microscópio", John Dellyargues que entre 80 e 90 % de todas as fotomicrografias submetidas a concursos, exposições e publicações científicas são vítimas de óptica inadequada alinhada, resultando em má iluminação da amostra. Esse é um dos problemas mais comuns com microscopia e fotomicrografia em geral, e um exame surpresa dos microscópios de estudantes em muitos laboratórios universitários revelará uma abundância de condensadores de subestrias mal ajustados e fontes de iluminação. Suspeitamos que o alinhamento e o ajuste incorretos do condensador de subestáge e do diafragma de campo, em toda a gama de objetivos em um determinado microscópio, sejam a maior fonte de erros na fotomicrografia.
A necessidade de iluminação adequada não pode ser enfatizada demais. Com demasiada frequência, um microscópio de US $ 25, {1}} é reduzido ao nível de um líquido de mão por iluminação e alinhamento inadequados, resultando em fotomicrografias que são superadas por aqueles que são tomados com um microscópio de US $ 2000 em condições ideais da iluminação de Köhler. Nas seções complementares deste primer, lidando com a teoria da iluminação Köhler e sua implementação (ambos fortransmittendRefletedlight), discutimos aspectos críticos da configuração do microscópio e incluímos uma variedade de interativos
